一抗宿主物种的选择一般说来,在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时,一抗宿主动物的物种选择较为重要,对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应,例如:检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,比较好选兔源的一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、生物素等)的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况,除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法,则抗体宿主物种的影响不大,如对不含IgG的细胞裂解物样本的westernblotting检测,尽管如此,含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白,还原变性样本中含IgG,在westernblot检测中则结合出现IgG分子50and25kDa的重链和轻链条带。 二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。大鼠抗体
【二抗的耦联标记】
一般来讲,耦联到二抗上的探针主要有酶(辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,***),荧光基团(FITC、Rhodamine、TexasRed、PE、Rhodamine、Dylight等)、生物素、金颗粒。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于WesternBlot和ELISA,**常用的二抗是酶标二抗;而细胞或组织标记实验(细胞免疫化学,组织免疫化学,流式细胞术)中通常使用荧光基团标记的二抗,免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号,可以使用Biotin/Avidin检测系统。在一些荧光检测方案中,则需要选择不同的荧光标记;而金颗粒标记的二抗则更多的应用于免疫电镜中。艾美捷能为您提供上述所有不同类型标记的二抗。 大鼠抗体***抗体就是能和非抗体性抗原特异性结合的蛋白。
【Anti-IgG(H+L)、Anti-IgG(gamma)、Anti-IgM(mu)、Anti-IgA(alpha)】在一些特殊的实验里,只需要检测样本里的IgG或者IgM,常规的Anti-IgG(H+L)由于与IgG的重链和轻链都有结合反应,而IgG、IgM、IgA都有保守的轻链结构域,因此不能特异性的检测某种类型的IgG或者IgM。这时候就需要针对特殊类型Ig分子的二抗。我们备有***的二抗现货产品并能提供**完整的二抗产品线。主要二抗品牌为全球比较大的二抗产品以及前沿抗体生产商EarthOx。按照标记分,有HRP、AP、生物素等标记二抗,FITC、TRITC、Rhodamine、Cy3/5、Dylight等荧光二抗;按照检测物种分,有抗人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛,以及多种细菌类二抗;另外,还有IgG、IgA、IgM以及IgG(Fc)、IgG(ab’)2等不同类型抗体。
如抗原为AC物质,产生的抗体为抗-ac,如抗原为BC物质,产生的抗体为抗-bc,AC物质和抗-ac、BC物质和抗-bc产生的是特异性结合,而AC物质和抗-bc、BC物质和抗-ac就会产生交叉反应。
犬猫和人类有所不同,因为人类和灵长类动物的血胎屏障允许母源抗体的转移,因此新生儿出生时血清免疫球蛋白浓度接近成年人。但犬猫只能转移少量的MDA,因此新生犬猫可能只有5-10%成年犬猫的血清免疫球蛋白水平。初乳中含有大量的母源抗体MDA、蛋白质、淋巴细胞和细胞因子。其中**重要的是初乳含有丰富的免疫球蛋白,IgG含量**多,但IgM和IgA含量较少。因此新生犬猫需要尽快吸食初乳,暂时被保护直到能够***内源性自身免疫。但是尽管被动获得母源抗体很重要,一些新生动物仍旧无法获得足够的初乳(出生后72H)。非常容易***疾病,“一只***全窝受罪”,为了避免这种情况的发生,尽早进行疫苗接种。 每种抗体与特定的抗原决定基结合。
什么是抗体的交叉反应性呢?看到有的抗体是小鼠来源的,但是跟人,大鼠,兔和猴子都有交叉反应性,什么是抗体的交叉反应性呢?这样的抗体可以用于人来源的细胞做westernblot实验吗?抗原分子表面存在着能与抗体相互作用的部位即抗原决定簇一种抗原物质可以有两个或更多的决定簇。研究表明,抗体是从抗原决定簇的立体结构而不是从抗原的***分子排列来“认识”抗原的。这样有时一种抗体可以与分子结构并不完全相同但具有类似抗原决定簇的不同抗原起反应,这称为交叉反应。如果你的抗体和其它种属有交叉反应,理论上可以用于人源的WB。市场上动物血清抗体大致分为兽抗体和禽抗体。大鼠抗体
按与抗原结合后是否出现可见反应,可分为:在介质参与下出现可见结合反应的完全抗体,即通常所说的抗体。大鼠抗体
抗体【Anti-IgG还是Anti-IgG,F(ab’)2fragment】
在一些如胸腺、脾脏、血液的组织以及造血细胞、淋巴细胞、B细胞等细胞内,通常含有较多的Fc受体,这时候选择二抗时比较好选择Anti-IgG,F(ab’)2fragment这样的特异性二抗,这样就消除了由于Fc部分与IgG的非特异性结合。常规的Anti-IgG(H+L)二抗与IgG的重链和轻链都有结合反应,即与IgG的Fc的F(ab’)2片段都能结合;由于IgG、IgM、IgA都有保守的轻链结构域,因此Anti-IgG(H+L)与它们都有交叉反应。而Anti-IgG,F(ab’)2fragment经过了IgG,Fc片段的吸附,因此只与IgG的F(ab’)2片段结合,然而IgG、IgM、IgA都有保守的轻链结构域,因此与它们也有交叉反应。 大鼠抗体
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