多聚甲醛溶液(1% PFA)

加药时间:由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质。所以筛选不能太早；但是也不能太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，终导致筛选不出阳性克隆，一般要在转染24小时之后才开始加G418筛选。随着细胞的代谢G418的浓度和活性都回下降，所以每3~5天都要更换一次含有G418的筛选液。这时药物浓度可以降至200ug/ml。培养液:加药筛选约6天左右，细胞会大量死亡，孔中只剩下的细胞。这时会出现两个问题：1.死亡的细胞会裂解释放出有害物质，导致那些有neo表达的阳性细胞死亡，即非选择性死亡。2.孔中细胞数目很少，细胞之间的信号会变得很弱，也会导致阳性细胞的状态不佳甚至死亡。这个时候需要一种特殊的培养液：假如你要转染3T3细胞，在3T3细胞汇合度达到80%的时候，换液，培养过夜之后收集培养液，通过滤器消毒，和新鲜的培养液按1：1混合备用。再转染后筛选过程中就可以应用这种培养基。利福平溶液怎么配制：加入40ml甲醇，振荡充分混合溶解之后定容50ml，可以涡旋。多聚甲醛溶液(1% PFA)

淋巴细胞亚群及其功能：T淋巴细胞及其分类主要应用抗T细胞表面抗原McAb.根据T淋巴细胞表面分化抗原将成熟T细胞分为CD4+、CD8-和CD4-、CD8+两大亚群，T淋巴细胞的功能与表现型之间的对应关系是相对的，其免疫活性可能受“微环境”的影响，并受MHC抗原的制约，许多研究证明，CD4+T细胞具有杀伤活性，介导Ι类抗原不相容时的靶细胞溶解。TU等研究表明，CD4+的细胞毒活性存在两种完全不同的机理，并证明TH1和TH2的细胞毒活性不同。前者强，后者弱或无活性。Dennert等发现，克隆化的T淋巴细胞具有辅助，细胞毒活性和迟发型超敏反应作用，这种功能的多样性有赖于所采用的分析方法。CD4+细胞识别Ι类MHC抗原，其效应的发挥也受Ι类抗原的制约；CD3+细胞识别Ι类MHC抗原，发挥免疫效应也受其控制。多聚甲醛溶液(1% PFA)每种细胞对G418的敏感性不同，一般变动在100ug/ml～1000ug/ml范围。

科研实验中试剂取用应注意事项：1. 取用少量的液体—使用胶头滴管a. 应在容器的正上方垂直滴入；胶头滴管不要接触容器壁【防止沾污试管或污染试剂】；b. 取液后的滴管，应保持橡胶胶帽在上，不要平放或倒置【防止液体倒流，沾污试剂或腐蚀橡胶胶帽】；c. 用过的试管要立即用清水冲洗干净；但滴瓶上的滴管不能用水冲洗，也不能交叉使用。2. 取用一定量的液体—使用量筒a. 当向量筒中倾倒液体接近所需刻度时，停止倾倒，余下部分用胶头滴管滴加药液至所需刻度线；b. 读数时量筒必须放平稳，视线与量筒内液体的凹液面的低处保持水平。

注意事项：1.对诊断的干扰:可引起直接抗球蛋白试验(Coombs试验)阳性;干扰血清叶酸浓度和维生素B12浓度测定结果;可干扰利用分光光度计或颜色改变而进行的各项尿液分析试验的结果，因使用利福平后可使尿液呈橘红色或红棕色。使用利福平可使血液尿素氮、血清碱性磷酸酶、血清丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、血清胆红素及血清尿酸浓度测定结果增高。2，酒精中毒，肝功能损害者慎用。一般肝病患者慎用。3.利福平可能引起白细胞和血小板减少，并导致齿龈出血和传染，伤口愈合延迟等。此时应避免拔牙手术，并注意口腔卫生，刷牙及剔牙均需慎重，直至血象恢复正常。利福平不能经血液透析或腹膜透析除去。

G418溶液是什么：G418(G418,G 418,G-418,Geneticin)是一种氨基糖苷类 ,这种氨基糖类的结构和新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似，在分子遗传试验中,是稳定转染常用的抗性筛选试剂。它通过克制转座子Tn601，Tn5的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生东西,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为ｍＲＮＡ ,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的表达 ,使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。Ｇ418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以普遍应用。溶液配制：G418溶液配制时，一般溶于水配成50mg/ml的原液，使用时再稀释使用。在筛选菌类和藻类时，一般用5mg/l 的浓度或者更低。筛选哺乳动物细胞是大可400mg/l的浓度。利福平溶液怎么配制：配制时每毫升可加入～5滴 10 N NaOH以助溶。多聚甲醛溶液(1% PFA)

固体试剂的取用:倒完液体后，要立即盖紧瓶塞，并把瓶子放回原处。多聚甲醛溶液(1% PFA)

pH缓冲溶液的类型与作用：pH缓冲溶液包括两大类：标准缓冲溶液和普通缓冲溶液。标准缓冲溶液主要用在酸度计测量溶液pH值时的仪器校正和定位，要求数值准确、精确。因此对试剂纯度、浓度准确性、温度等都有严格要求，这类缓冲溶液有专门的化学试剂商品，可以购买配制，也可以用优级纯试剂按资料的配比配制。普通缓冲溶液主要用于化学分析和仪器分析中要控制一定pH值的测定过程中。几乎所有的EDTA络合滴定都必须在一定的pH范围内进行，因此，需要加入pH缓冲溶液，例如，测定铅、锌用到HAc缓冲溶液，测定钙、镁、锌用到氨缓冲溶液。又如，氧化还原滴定中，碘量法测铜要用到NH4HF2，碘量法测砷、锑要加NaHCO3。多聚甲醛溶液(1% PFA)

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