荧光阈值(threshold)是以 PCR 反应前 15 个循 环的荧光信号作为荧光本底信号(baseline), 荧光阈 值的缺省设置是 3 ～ 15 个循环的荧光信号标准差的 10 倍 ,即:Threshold =10SD(cycle 3 ～ 15),一般认 为在荧光阈值以上所测出的荧光信号是一个可信的 信号,可以用于定义一个样本的 Ct 值。 Ct 值也称 阈值循环(threshold cy cle),指在 PCR 循环过程中, 荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的拐点所对 应的循环次数,也就是每个反应管内的荧光信号达 到设定的阈值时所经历的循环数 。 上海融享生物科技有限公司主...

SYBR Green Ⅰ是一种非饱和菁类荧光素，可以 嵌合于 DNA 双链结构的小沟中，非特异地与 dsDNA 分子结合，是应用较广的非探针类化学检测物。 在 PCR 反应体系中，加入过量的 SYBR Green Ⅰ荧光 染料，使其特异地与 dsDNA 分子结合后，发射荧光信 号，荧光强度随着聚合反应的进行逐渐增加; 因此，可 被荧光探测系统检测到，荧光强度的增加与初始模板 量相关，可以进行定量 DNA 分析。荧光染料的优势 在于它能监测任何 dsDNA 序列的扩增，不需要探针 的设计，检测方法简便，降低了检测成本。然而，由于 荧光染料能与任何 dsDNA 分子结合，也能与非特异 性...

尽管在实验设计中，所涉及的荧光定量 PCR 仪 器操作步骤简单，且易于进行结果分析。但是，在采用 实时荧光定量 PCR 技术进行研究时，由于涉及的步骤 繁多，如从 RNA 样本制备、基因组或质粒 DNA 的去 除［12］，反转录 PCR 到内参基因的校准及操作者的试 验技术和所用试剂都会影响终结果。因此，在明确 研究目的之初，就应对整个研究项目进行合理的规划 设计。RNA 基因沉默技术是由于作用于同源序列 mRNA 的双链 RNA 所介导的序列特异性、转录后基因 沉默机制［13］。因其具有严格的序列特异性，基因调控 效果明确、的针对性强、副作用小等优点，所以，将 RNA 干扰技术应用于人类疾病...

在常规 PCR 基础上添加了荧光染料或荧光探 针 。而用于常规 PCR 的专门热循环仪配备荧光检 测模块 ,可监测扩增时的荧光 。荧光染料能特异性 掺入 DNA 双链, 发出荧光信号, 而不掺入双链中的 染料分子不发出荧光信号 , 从而保证荧光信号的增 加与 PCR 产物增加完全同步 。荧光探针法是指当 标记在探针的 5 ′端荧光报告基团 (reporter R )未被 标记在3 ′端淬灭基团 (quencher Q )影响时, 可检测 到报告基团的荧光信号 。检测到的荧光信号的强度 与 PCR 反应产物的量成正相关,即每扩增一条 DNA 链, 就有一个荧光分子形成, 实现了荧光信号的累积 与...

实时荧光定量 PCR 技术可用于检测特异性突变基因，因为扩增 DNA 的 核苷酸序列不需要分子克隆和宿主细胞内的生长准 备，即可在媒介生物分子纯化过程中直接测得。利用 实时荧光定量 PCR 和间接测序方法，可对已知 DNA 序列进行基因突变及多态性分析。 实时荧光定量 PCR 技术 可用于对转基因产品的检测和定量。目前，该技术在 生物安全检测中的应用主要有: 动物中基因载体 生物分布的确定、生物疗法中残留 DNA 的定量、污染 细胞库和终产物中和细菌核酸的检测、研究 中水平的定量、疫苗中逆转录活性的特 异性检测及遗传稳定性监控中转基因拷贝数的...

双杂交探针也是 TaqM an 探针的衍 生形式,是由 Roche 公司开发的一种 PCR 定量技术 (LightCy cler(r)实时荧光定量 PCR 系统)。该技术 的特点是将荧光基团和淬灭基团分别标记在发光探 针的 5' 端和淬灭探针的 3' 端两个不同探针上 ,两探 针可与模板同一条链相邻的序列杂交, 杂交时两探 针的荧光基团和淬灭基团便紧密相邻(1 ～ 5 bp), 从 而发生 FRET 使荧光淬灭, 荧光淬灭的程度与起始 模板的量成反比, 以此可以进行 PCR 定量分析 (Hardegg er 等 , 2000)。该方法的特点是淬灭效率 高,但由于 2 个探针结合在模板上 ,从而...

荧光定量 PCR 技术在食品监测以及环境监测中均有应 用。食品中可能含有一些有害的细菌，利用荧光定量 PCR 技 术可对食品中的某一细菌进行定量分析，灵敏度和可靠性 高。环境中的微生物，如大气环境中的大肠杆菌，水环境中 的蓝细菌、赤潮藻、假单胞菌，土环境中的炭疽芽孢杆菌是 否超标，严重影响着人类、水生生物以及植物的健康生长， 荧光定量 PCR 技术能对其实现定量分析，对环境进行检测。 另外，荧光定量 PCR 技术也广泛应用于医 学，如疾病的 诊 断、病原体以及基因缺陷性疾病的检测。 上海融享生物科技有限公司主营qPCR包括价格优惠。陕西Taq...

双杂交探针也是 TaqM an 探针的衍 生形式,是由 Roche 公司开发的一种 PCR 定量技术 (LightCy cler(r)实时荧光定量 PCR 系统)。该技术 的特点是将荧光基团和淬灭基团分别标记在发光探 针的 5' 端和淬灭探针的 3' 端两个不同探针上 ,两探 针可与模板同一条链相邻的序列杂交, 杂交时两探 针的荧光基团和淬灭基团便紧密相邻(1 ～ 5 bp), 从 而发生 FRET 使荧光淬灭, 荧光淬灭的程度与起始 模板的量成反比, 以此可以进行 PCR 定量分析 (Hardegg er 等 , 2000)。该方法的特点是淬灭效率 高,但由于 2 个探针结合在模板上 ,从而...

TaqmanMGB 探针是在 Taqman 探针的基础上改 进的，在探针的 3'端增加了小槽黏结剂( MGB) 分子， 这种物质能够结合在双链 DNA 小沟部位。MGB 可 将探针的 TM 值提高 10 ℃ 左右，从而使其能够分辨 1 个碱基的差别，如完全配对则有荧光信号，若有1 个 碱基不匹配则没有信号，而且连在 MGB 分子后面的 是非荧光物质的淬灭基团，从而使这种探针具备更好 的淬灭效果，且无背景荧光、荧光标记灵活、荧光信号 的信噪比高、退火温度高、探针短、核酸多态性( SNP) 识别率高，从而使 TaqmanMGB 探针具备了更加广阔 的应用前景。 上海融享生物科技有限专业q...

SYBR GreenI 的优点在于:①成本较 低, 不需合成和标记探针 ;②适合初步筛查:选用 SYBR 筛查 , 再用探针法精确定量少数关键样品 。 但SYBR GreenI 缺点有:①特异性差 , 不能分辨主带与杂带 , 给 出的是总信号, 所以在低样本浓度时,不能进行基因 突变分析 。但该方法可利用熔点曲线分析将特异产 物、引物二聚体和非特异性产物区别开来,不需要通 过电泳鉴定(Qzaki 等 , 1992);②不能做多重检测 , 每孔只能检测 1 个目标基因;③灵敏度低, 适合于 5000 拷贝以上的基因定量。上海融享生物科技有限公司qPCR的怎么样？浙江实时荧光定量qPCR机构哪家好...