在 PCR 反应体系中，加入过量的 SYBR Green Ⅰ荧光 染料，使其特异地与 dsDNA 分子结合后，发射荧光信 号，荧光强度随着聚合反应的进行逐渐增加; 因此，可 被荧光探测系统检测到，荧光强度的增加与初始模板 量相关，可以进行定量 DNA 分析。荧光染料的优势 在于它能监测任何 dsDNA 序列的扩增，不需要探针 的设计，检测方法简便，降低了检测成本。然而，由于 荧光染料能与任何 dsDNA 分子结合，也能与非特异
性的 dsDNA 分子( 如引物二聚体) 结合，产生荧光干 扰，使试验产生假阳性结果。目前，可以用带有熔解 曲线分析的软件解决这个问题。 上海融享生物科技有限公司主营qPCR包括。河北TaqMan荧光探针qPCR机构电话
在采用 SYBR Green I 法进行相对定量时，需要 利用熔解曲线排除非特异产物或引物二聚体对测定结 果的影响。有研究建议在每一个循环中 PCR 延伸后 增加一步，即将温度提高后再检测反应体系中的荧 光［15］。该检测温度大于引物二聚体的退火温度 Tm， 而小于特异性扩增产物的 Tm 值。在此温度下，引物 二聚体都变性成单链，因此只检测到与特异性 PCR 产 物结合的 SYBR Green I 所发出的荧光，消除了引物 二聚体的干扰，降低了非特异性荧光，有助于目标基因 的准确定量。
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荧光探针法
荧光探针是指在寡聚核苷酸上结合荧光报告基团与荧
光淬灭基团，由激发态的报告基团回到基态的过程会释放
荧光，当报告基团与淬灭基团离得很近时，激发态的报告基
团会将荧光传递给淬灭基团从而不发射荧光。荧光探针法
大体上分为水解探针法、双联置换探针法和杂交探针法。
Taqman 探针的基础上研发出了 Taqman MGB 探针，
该探针的 3′端除了有淬灭基团外，增加了一种 MGB 基团，
该基团能够与双链 DNA 的小沟结合，使探针与靶序列的亲
和力增强，探针 Tm 可提升 10 度左右，长度可适当减少，降
低了合成成本。另外，Taqman MGB 探针 3′端的淬灭基团本
身不发荧光，从而降低了荧光本底信号。
RT-QPCR 是在**初的聚合酶链式反应的原
始基础上增加化学成分：荧光基团或荧光染料，
然后利用采集到的荧光信号，从而对酶促反应的
扩增情况动态地、实时地监测[1]目前，使得这项
成熟的扩增技术已经变成更新、更强大的定量检
测体系进一步研发的基础，它与衍生的相关技术
与手段现已经在很多领域占得了非常重要的地
位了。**早在 1992 年，Higuchi 等初次提出将动
态 PCR 连同封闭性荧光检测技术共同使用，以
对特定的基因数量进行定量的分析，开辟了研究
优化基本的 PCR 的新思路。 对于不同的需求我们选择不同的qPCR。
Absolute Quantification法也称作标准曲线法，是一种利用已知的标
准曲线来定量未知样本目的模板起始量的方法。以 5 点梯
度稀释所得的标准品为模板，经实时荧光定量 PCR 扩增，以
目的模板初始拷贝数的对数为横坐标，检测到的 CT 值为纵
坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程，将未知样本的 CT
值带入该方程即可计算出目的模板的起始量。标准曲线的各
项指标：斜率、扩增效率（E）、相关系数（R2
）、间距均需进行
严格评价，从而确保该曲线的可用性。 您知道上海融享生物科技有限公司的qPCR都有哪些吗？河北TaqMan荧光探针qPCR机构电话
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SYBR GreenI 的优点在于:①成本较 低, 不需合成和标记探针 ;②适合初步筛查:选用 SYBR 筛查 , 再用探针法精确定量少数关键样品 。 但SYBR GreenI 缺点有:①特异性差 , 不能分辨主带与杂带 , 给 出的是总信号, 所以在低样本浓度时,不能进行基因 突变分析 。但该方法可利用熔点曲线分析将特异产 物、引物二聚体和非特异性产物区别开来,不需要通 过电泳鉴定(Qzaki 等 , 1992);②不能做多重检测 , 每孔只能检测 1 个目标基因;③灵敏度低, 适合于 5000 拷贝以上的基因定量。河北TaqMan荧光探针qPCR机构电话